罗格于（Ben Wright 配音）和阿尼塔（Lisa Davis 配音）夫妇饲养的大麦町狗庞哥（Rod Taylor 配音）与帕蒂塔（Cate Bauer 配音）喜结良缘，共组成欢乐家庭。没过多久，帕蒂塔生育了十五只小狗。正在一家人享受小狗带来的欢乐之际，阿尼塔的女上司克鲁拉·德维尔（Betty Lou Gerson 配音）打起了坏主意。她正在为制作一件黑白斑点的大衣而发愁，于是她派人绑走了小狗，和其他八十四只大麦町幼犬一同关在乡间的空屋里。发现孩子失踪的庞哥与帕蒂塔，通过狗吠召集全市的狗类，一同找寻自己的孩子，一场小狗救援记就此展开，庞哥与帕蒂塔能否在小狗被宰杀之前营救他们逃出呢……
《101斑点狗》是迪士尼1961年推出的第17部经典动画，取材自Dodie Smith 的作品。